牛血清那些你不知道的事

　　血清的用途

　　科研實驗中，細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如特級胎牛血清，它適合各種細胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細胞。

　　牛血清是一種成分復(fù)雜的混合物，其大部分成分已為人所知，但還有一部分仍不清楚，而且血清的組成及含量通常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而存在差異。

　　血清的主要成分

　　蛋白質(zhì)類

　　包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促進細胞附著)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(能結(jié)合鐵離子，減少其毒性和被細胞利用)、纖維粘連素(促進細胞附著生長)等;

　　多肽類

　　主要是一些促進細胞生長和分裂的生長因子，最主要的生長因子是血小板生長因子，還有成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經(jīng)細胞生長因子等，雖然在血清中含量很少，但對細胞的生長和分裂也起著重要作用;

　　激素類

　　激素對細胞的作用是多方面的。包括：促進細胞攝取葡萄糖和氨基酸，與促細胞分裂有關(guān);類胰島素生長因子：能與細胞表達的胰島素受體結(jié)合，從而有胰島素同樣的作用：促生長激素：促進細胞增殖的效應(yīng);血清中含有微量該成分，它可能具有促細胞貼附和增殖作用。但有人證明，血清中的氫化可的松，在細胞密度較高時可能有抑制細胞生長和誘導(dǎo)細胞發(fā)生分化的作用。

　　其他成分

　　如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培養(yǎng)基中這些成分的作用并不明顯，與蛋白相結(jié)合的微量元素對細胞生長起促進作用。

　　使用注意事項

　　血清的保存

　　在-15℃以下血清的有效期為5年，4℃可保存數(shù)周，不宜室溫保存，不宜反復(fù)凍融。配制成培養(yǎng)基后應(yīng)在四周內(nèi)用完，一瓶血清如無法一次用完應(yīng)無菌分裝成恰當數(shù)量并冷凍保存。

　　血清中的絮狀沉淀物

　　血清是多種蛋白質(zhì)的混合物，在凍融過程中會出現(xiàn)絮狀沉淀物，主要原因是由于血清中脂蛋白和纖維蛋白變性所造成。但并不影響血清本身的質(zhì)量和使用。如需去除可先400g離心取上清液配制成培養(yǎng)基再過濾即可使用。

　　血清的解凍

　　合理的解凍方式可以更好的保護血清質(zhì)量并可以在上減少絮狀沉淀物的產(chǎn)生。血清從低溫冰箱中取出后，經(jīng)4℃冰箱、室溫、37℃水浴逐步規(guī)則搖晃均勻融解，直至融解后再使用。

　　血清的熱滅活

　　將血清嚴格56℃水浴均勻加溫30分鐘可以滅活血清中的補體系統(tǒng)。是不是所有用途的血清都需要熱滅活呢?對大多數(shù)細胞來說是不需要的。激活的補體能參與溶解細胞，刺激光滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。因此在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌肉細胞時，建議使用熱滅活血清，在正常情況下加熱處理對血清的促細胞生長效應(yīng)無明顯促進作用，甚至?xí)驗榧訜崽幚碛绊懷宓馁|(zhì)量。

　　血清中的“小黑點”現(xiàn)象

　　血清在經(jīng)過一段時間的低溫凍存再融解后，在正常情況下會出現(xiàn)絮狀蛋白沉淀。但往往有用戶反應(yīng)血清中有“小黑點”現(xiàn)象，認為是微生物污染。實驗發(fā)現(xiàn)血清在37℃環(huán)境放置時間過長或經(jīng)過加熱滅活處理，血清中的沉淀物往往會呈增多趨勢，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，讓使用者誤以為是血清遭受微生物污染并在分裂增殖。因此如無必要，可以不進行熱滅活處理并保證血清的低溫保存。

　　注：以上資料僅供參考，不同品牌產(chǎn)品可能存在設(shè)計差異，操作前建議參考說明書‌。

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