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必知干貨——酶標板的選購要注意哪些方面

更新時間:2023-04-23    點擊次數(shù):4290

  必知干貨——酶標板的選購要注意哪些方面
 

  在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時間等條件起著關鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯表面對抗原、抗體或抗原抗體復合物的吸附也起著重要作用。

  酶標板一般要比細胞培養(yǎng)板貴,細胞板主要做細胞培養(yǎng),也可以用來測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應板,一般不用做細胞培養(yǎng),它主要做免疫酶聯(lián)反應后的蛋白檢測,需要更高的要求和特定的酶標工作液。

 

黑色培養(yǎng)板.jpg

  一:根據(jù)酶標板底部的不同,可以分為平底、U型底、V型底

  平底的折射率低,適于在酶標儀檢測;U型底的酶標板折射率較高,方便加樣、吸樣、混勻等操作,可以不用放在酶標儀上,直接通過目測觀察顏色變化情況,從而判定有無相應的免疫反應。V底的酶標板可以精確的吸取樣品。

  二:根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同,分為高結合力、中結合力和氨基化

  高結合力:表面經(jīng)處理后,其蛋白結合能力大大增強,可達300~400ngIgG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應。抗原或抗體包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。

  中結合力:經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

  氨基化:經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。

  三:根據(jù)顏色分為透明、黑色、白色

  透明的是常用的,用于最一般的酶聯(lián)免疫實驗。相對于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標板自身會有光吸收,所以它的信號相對于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測較強的光,如熒光檢測。而白色的酶標板就用于較弱的光檢測,常用于一般的化學發(fā)光。另外黑色的酶標板還可以消弱非特異反應帶來的問題。有些客戶會問,用一般的酶標板可不可以進行發(fā)光檢測,回答是不可以的,因為一般從化學發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說各個方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子,光不僅會從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會通過各個孔之間的間隙和孔壁。這樣的話,光較強時相鄰孔之間的影響就會很大,因此不能用透明的酶標板來進行化學發(fā)光實驗。

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